2021年5月20日,来自扬州大学李碧春、陈国宏等研究团队在Nature Communications上在线发表了题为“Productionof viable chicken by allogeneic transplantation of primordial germ cellsinduced from somatic cells”的研究论文,将黑羽狼山鸡的鸡胚胎成纤维细胞(CEFs)转分化为PGCs,并将其移植到白普利茅斯洛克鸡胚胎中,以产生具有遗传自供体特征的可行后代。
用体细胞克隆进行无性繁殖已在20多种哺乳动物中进行。然而,由于禽类特殊的卵生繁殖方式,使体细胞核移植无法进行,因此这种技术从未在禽类中成功应用。长期以来,技术上的限制阻碍了禽类遗传学、发育生物学和胚胎操作领域的研究进展。
鸡原始生殖细胞(PGCs)的异体移植被证明可以产生后代,并可用于禽类的克隆方法。目前的PGC移植方法,从4.5天发育的鸡性腺中无法收获满足要求的细胞数量。体细胞很容易大量获得,并在体外迅速增殖。因此,CEFs向PGCs的转分化可以克服鸡胚中PGCs不足的限制,用于禽类克隆,这将有助于维护家禽种质资源,甚至可能恢复濒危物种。
此外,CEFs很容易进行基因改造,这将有助于生产转基因鸡和开发优化的家禽品种。总的来说,建立一个将CEFs重新编程为PGCs的策略将在未来具有潜在的工业应用。
一些研究试图从哺乳动物的皮肤干细胞(SDSCs)中诱导PGCs。在小鼠中,B27、表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导PGCs的效率为7%,通过添加fetuin、维甲酸(RA)、骨形态发生蛋白4(BMP4)和激活素A12,该效率提高到61.9%。在猪的模型中,通过添加卵泡液、胰岛素转铁蛋白硒(ITS)和卵泡刺激素(FSH)诱导重新编程的PGCs。
据报道,在人类中,胎盘素、ITS、EGF、激活素A和BMP4都能成功诱导PGC的形成。此外,胚胎干细胞(ESCs)与表达BMP4的滋养细胞共培养时,诱导小鼠分化为PGCs(2.9%),最后成为功能性精子。研究表明,加入BMP4、BMP8b或LIF等成分可将PGC诱导率提高到13.5%-30%,并在小鼠中成功产生了后代。
与哺乳动物相比,鸡的PGC诱导很少被报道。在鸡胚胎干细胞中过量表达Cvh可产生PGC样细胞,其效率仅为0.5%。后来用BMP4和RA诱导PGC的研究,其效率也很低,>10%。最重要的是,从体细胞诱导PGCs并产生克隆的后代,在鸡中从未实现。
研究人员曾用BMP4在体外成功地将鸡的ESCs诱导成PGCs。然而,ESCs也很难分离,而且不容易转化为PGCs。Lu等人证明CEFs可以被诱导为具有人类POU5F1、NANOG、SOX2、LIN28、KLF4和C-MYC基因的诱导多能干细胞(iPSCs),并且这些细胞表达几个PGC标记基因。然而,据报道,体内移植后没有产生后代。因此,迫切需要开发一种有效的体外诱导PGC的方法来解决禽类克隆的局限性。
该研究旨在通过移植来自体细胞的iPGCs,有效地产生具有供体特征的有活力的鸡。在此,将黑羽狼山鸡的CEFs重编程为iPSCs,并诱导其发育成iPGCs,将其移植到白普利茅斯洛克鸡胚胎中,产生功能性精子或卵细胞。通过自交,受体产生后代,这些后代被确认为继承了捐赠者的遗传信息。
总之,这项研究报告了从禽类体细胞产生后代的情况,它克服了禽类物种在遗传上统一个体复制的门槛。
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